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Tricine-SDS-PAGE电泳能够较好的分离10KD以下的蛋白或多肽，是电泳法分离多肽的主要方法，Gel Buffer含有pH值为8.45的Tris-HCl缓冲液和SDS。

• 过硫酸铵配制成10%溶液分装后-20℃保存，应尽量减少室温存放时间以防失效，取出的APS溶液可短期4℃保存，有效避免失效的方法是分成小份，即一般用1.5mL EP管分装成0.5～1mL/支，-20℃保存，每支使用2～3次即弃用。
  
• TEMED极易挥发，使用后请盖紧瓶盖4℃保存，另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可通过适当调节TEMED的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
  
• 配制聚丙烯凝胶的过程中如果冬天室温较低情况下，上下层胶出现白色沉淀是正常现象，可以置于37℃水浴锅溶解后使用；冬天气温较低，分离胶凝固较慢，可将胶板置于空调下加速凝固。
  
• 在分离胶上层加蒸馏水时要缓慢，速度不宜过快。
  
• 49.5%T 3%C和49.5%T 6%C为不同比例的Acr-Bis，有神经毒性，请小心操作，长期使用置于4℃有助于其性能的稳定。
  
• 如需测定大分子蛋白可选购PAGE凝胶制备试剂盒或SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 配制10%过硫酸铵(APS)：直接在0.3g APS中加入3mL蒸馏水(1g每瓶加入10mL蒸馏水)，充分溶解，分装成小份储存于-20℃或4℃。
  
• 按照附表配制分离胶，根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度：
  
  • 将不同体积的蒸馏水、49.5%T 6%C、Gel Buffer、Glycerol加入到离心管中并充分混合。
    
  • 加入10%APS和TEMED，立即涡旋混匀5～10s，以使溶液充分混匀。
    
  • 在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液(1mm mini-gel，分离胶溶液加约4mL），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1～3cm的水层，使凝胶表面保持平整。
    
  • 静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
• 按照附表配制夹层胶：
  
  • 去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水尽量吸去。
    
  • 将不同体积的蒸馏水、49.5%T 3%C和Gel Buffer加入到离心管中混合。
    
  • 加入10%APS和TEMED，立即涡旋混匀5～10s，以使溶液充分混匀。
    
  • 将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面(对于1mm的mini-gel，夹层胶溶液加约1mL)，然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层1～2cm的水层，使凝胶表面保持平整。
    
  • 静置，待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
• 按照附表配制浓缩胶：
  
  • 去除覆盖在夹层胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
    
  • 将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C和Gel Buffer加入到离心管中混合。
    
  • 加入10%APS和TEMED，立即涡旋混匀5～10s，以使溶液充分混匀。
    
  • 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
    
  • 静置，待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，避免破坏加样孔，进行电泳操作。
• 电泳：将电泳槽置于4℃或冰水浴中，外槽加入阳极缓冲液，内槽加入阴极缓冲液，30V预电泳10min，将处理好的样品加入点样孔，30V电泳1h，100V电泳至溴酚蓝到达胶底部后停止电泳，进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。